시료준비

 BioSignal2의 ENLIGHT OMEGA Toolbox 시약을 사용하여 PROTAC(Proteolysis-Targeting Chimeras) 분석법 개발을 촉진하는 방법을 설명합니다. PROTAC은 세포 단백질 분해를 유도하기 위해 E3 유비퀴틴 리가아제에 표적 단백질을 연결하는 저분자입니다.

핵심 내용:

• PROTAC 분석: 단백질-단백질 상호 작용 및 큰 번역 후 변형을 감지하는 이상적인 기술인 OMEGA를 사용하여 PROTAC 개발의 다양한 단계를 촉진하는 방법을 설명합니다. OMEGA는 200nm의 매우 먼 거리에서 근접성을 측정하여 부피가 큰 단백질 복합체의 검출을 허용하는 TR-FRET과 대조됩니다.
• Sensibeads 및 Chemibeads: BioSignal2의 ENLIGHT OMEGA 시약은 관심 단백질(POI) 및 E3 리가아제의 효율적인 캡처 후 PROTAC 리간드의 쉬운 특성화를 허용하는 Sensibeads 및 Chemibeads의 조합을 사용하여 수행할 수 있는 분석을 용이하게 합니다. 또한 유비퀴틴화에서 세포 분해까지 POI의 다운스트림 처리를 모니터링할 수 있습니다.
• PROTAC 개발 단계: ENLIGHT OMEGA 시약은 다음과 같은 PROTAC 개발의 다양한 단계를 촉진합니다.
  1. POI 참여: 삼중 복합체 형성 측정
  2. 기능성 E2 모집: 4차 복합체 측정
  3. POI 다중 유비퀴틴화 측정:
  4. 세포 POI 분해 측정:
• 분석 유형: 설명된 분석은 다음과 같습니다.
  • 삼중 복합체 형성(생화학적, 신호 증가): GST-E3 및 His-태그 POI와 같은 재조합 태그 단백질을 사용하여 측정됩니다.
  • E2 리가아제 모집(생화학적, 신호 증가): POI 폴리유비퀴틴화를 시작하는 데 필요한 삼중 복합체에 의한 E2 모집을 측정합니다.
  • POI 폴리유비퀴틴화 측정(생화학적, 신호 생성): 비오티닐화 TUBEs(Tandem Ubiquitin Binding Entities)를 사용하여 POI 폴리유비퀴틴화 정도를 측정합니다.
  • POI 분해 측정(세포, 신호 손실): PROTAC 노출 후 재조합 또는 내인성 POI의 세포 분해를 측정합니다.

결론:

 BioSignal2의 ENLIGHT OMEGA Toolbox는 PROTAC 개발 프로세스의 여러 단계를 지원하는 귀중한 리소스를 제공합니다. 재조합 태그 단백질을 사용하여 POI 참여 및 E2 리가아제 모집을 측정하는 기능은 PROTAC 설계의 초기 단계에서 유용할 수 있습니다. 또한 POI 다중 유비퀴틴화 및 분해를 평가하는 기능은 PROTAC 효능 및 세포 활성에 대한 귀중한 통찰력을 제공합니다.